牛白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 张欣 房红莹 罗满林 胡寻 陈钜豪
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 牛白细胞介素15 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 动物科学与兽医学
• 页码范围: 81-85
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4459字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-411X.2009.01.019

摘要

根据cenBankTM中发表的牛IL-15基因序列设计并合成了特异性引物,以经LPS和ConA刺激的牛外周血单个核细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出长度约500 bp的目的基因片段,并将该基因克隆到pMD18-T载体上.酶切、PCR及序列测定结果表明,获得了牛IL-15全长基因的克隆.进一步通过PCR方法得到缺失其N端48个氨基酸的信号肽序列的牛IL-15成熟蛋白基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a上,构建重组表达质粒pET-IL-15,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,该菌表达以包涵体形式存在的相对分子质量约为33 000的融合蛋白.用Ni螯合层析方法纯化表达的蛋白.Western-blot试验显示表达的重组融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应,同时也能与鼠抗猪IL-15的多克隆抗体发生明显交叉反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	房红莹	华南农业大学兽医学院	19	63	5.0	7.0
3	罗满林	华南农业大学兽医学院	111	453	11.0	14.0
4	张欣	华南农业大学兽医学院	11	31	4.0	4.0
7	陈钜豪	华南农业大学兽医学院	5	14	2.0	3.0
8	胡寻	华南农业大学兽医学院	1	1	1.0	1.0