人白细胞介素24基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

• 作者: 方艳秋 杨丹 段秀梅 许淑芬 谭岩
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 白细胞介素24 干扰素Ⅱ型 白细胞介素6 瘤坏死因子
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 266-269
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3100字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2008.02.024

摘要

目的:构建人白细胞介素24(hIL-24)基因原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达hIL-24蛋白,并测定其生物学活性.方法:用PCR方法从含有hIL-24的质粒中扩增hIL-24 cDNA序列,测序鉴定正确后,应用基因重组技术构建PQE/hIL-24,并转入大肠杆菌(E.coli) M15.IPTG诱导表达目的蛋白,镍凝胶亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析鉴定结果,应用外周血单核细胞(PBMCs),通过ELESA法分别在48和72 h检测rhIL-24刺激的PBMCs中IL-8、IFN-γ及TNF-α产生情况.结果:获得与GenBank中报道一致的hIL-24基因片段.SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示,获得具有hIL-24免疫原性、相对分子质量约为18400目的蛋白.Ni2+-NTA agarose纯化得到单一条带蛋白,获得rhIL-24蛋白刺激的PBMCs,PBMCs分泌IL-6、IFN-γ、TNF-α的水平显著高于未刺激前分泌水平(P<0.05),rhIL-24具有与天然hIL-24蛋白相同的生物学活性.结论成功地构建了hIL-24的原核表达载体,在E.coli中高效表达了rhIL-24蛋白,获得了与天然hIL-24蛋白具有相同生物学活性的rhIL-24.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭岩	吉林大学第一医院中心实验室	135	608	9.0	17.0
2	段秀梅	吉林大学第一医院中心实验室	63	241	7.0	12.0
3	方艳秋	吉林大学第一医院中心实验室	76	250	7.0	11.0
4	许淑芬	吉林大学第一医院中心实验室	37	200	6.0	13.0
5	杨丹	吉林大学第一医院中心实验室	22	82	3.0	8.0