双标记选择载体转染牛胎儿成纤维细胞方法的建立

• 作者: 戴蕴平 李宁 樊宝良 王海平 王莉莉 赵春江 郑敏 龚国春
• 来源期刊: 自然科学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 双标记选择载体 牛 胎儿成纤维细胞 电击 基因转染
• 年，卷（期）: 2002,（12）
• 所属期刊栏目: 研究简讯
• 页码范围: 1318-1320
• 页数: 3页
• 分类号: Q81
• 字数: 2543字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-008X.2002.12.017

摘要

以经SspI和BamHI对所构建的双标记选择载体质粒pCE-EGFP-IRES-Neo-dNdB双酶切后的线性目的DNA为外源基因,对电击介导的牛胎儿成纤维细胞基因转染方法的效率进行了优化.实验结果表明,当电场强度为1.2kV/cm、脉冲时间为1ms时可获得约50个阳性细胞克隆/10 5 个细胞的最佳转染效率.通过牛胎儿成纤维细胞对不同浓度G418抗性的敏感性实验确定800μg/mL G418为快速筛选浓度,以300μg/mL G418为维持筛选浓度.从两个牛胎儿成纤维细胞系中共分离了56个绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞克隆,从中选取2个冷冻保存.经PCR检测,证实2个冷冻克隆株均含有所转染的外源基因.