小鼠MIP1-α重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞中的表达

• 作者: 卫立辛 吴孟超 杨广顺 杨庆 江小玲 王维锋 贾凤岐
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肝肿瘤 MIP1-α 腺病毒载体 细菌同源重组系统
• 年，卷（期）: 2002,（5）
• 所属期刊栏目: 肝脏肿瘤的基础和临床研究
• 页码范围: 494-497
• 页数: 4页
• 分类号: R735.7
• 字数: 4050字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2002.05.011

摘要

目的:构建小鼠趋化因子MIP1-α(mMIP1-α)的重组腺病毒载体并在小鼠肝癌细胞中表达,为肝癌基因治疗提供实验基础.方法:PCR扩增含有mMIP1-α的质粒,将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1以及线性化的重组穿梭质粒pTrack-CMV- mMIP1-α共转化BJ5183受体菌并在其中发生同源重组,利用重组前后抗性的改变筛选出重组子,重组腺病毒质粒经过293细胞的包装、扩增和纯化后,感染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6,一步法提取细胞总RNA,RT-PCR检测mMIP1-α的mRNA.琼脂糖凝胶打孔法体外观察感染上清中mMIP1-α对小鼠脾细胞的趋化活性.结果:得到了携带mMIP1-α的重组腺病毒,纯化后滴度为4×1011 efu/ml,在感染后的Hepa1-6细胞中检测到mMIP1-α的表达,上清中mMIP1-α的趋化指数为6.3.结论:成功地构建了携带mMIP1-α的重组腺病毒载体,为下一步应用于肝癌的基因治疗提供了基础.