肝内胆管癌hTR的反义RNA及锤头状核酶基因真核表达载体的构建

• 作者: 卞继峰 卢翌 姜希宏 王伟 王晓明 耿昭 胡海燕 靳丹 靳斌
• 来源期刊: 中国现代普通外科进展
• 学科: 医学
• 关键词: 胆管肿瘤·端粒酶·RNA 反义·核糖核酶酶类·基因表达
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 215-219
• 页数: 5页
• 分类号: R735.8|Q782
• 字数: 609字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-9905.2003.04.008

摘要

目的:用反转录PCR法,调取肝内胆管癌细胞内的端粒酶RNA(hTR)基因,并针对其序列设计反义RNA封闭基因及锤头状核酶切割基因序列,并将其构建入真核表达载体pTriEx-4内.方法:根据hTR cDNA序列,设计引物,RT-PCR法从体外培养的肝内胆管癌细胞内调取hTR模板区基因,根据其测序结果,合成反义RNA基因及核酶基因,与经相应酶切的真核表达载体连接,酶切鉴定重组体的正确性.结果:经RT-PCR从细胞内调出68bp序列,与hTR cDNA比较,与模板区域碱基序列一致,反义RNA与核酶基因重组子经酶切鉴定序列正确.结论:RT-PCR法可调出其hTR基因有效片段;成功构建了针对hTR模板区的反义RNA基因和核酶基因的真核表达载体.