Epstein-Barr病毒LMP1蛋白羧基端的克隆与原核表达

• 作者: 张雪雁 杨英 汤郡 马桂璋
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽癌 EB病毒 LMP1 原核表达
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 128-132，175
• 页数: 6页
• 分类号: R739.63
• 字数: 4939字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2003.02.002

摘要

目的构建PGEX-6P-3-CCT原核表达载体,获得大量纯化的LMP1羧基端蛋白.方法通过RT-PCR技术从B95-8细胞中扩增EBVLMP1 CCT cDNA,克隆至PGEM-T easy载体上并测序.利用引物上的BamH I与EcoRI酶切位点将CCT基因插入PGEX-6P-3,转化大肠杆菌BL21,限制性内切酶消化鉴定.IPTG诱导重组菌株表达,用SDS-PAGE与Western blot对表达产物进行鉴定,并用Sepharose 4B亲和层析柱对表达产物进行纯化,PreScissionProteas酶对融合蛋白进行解离.结果扩增的LMP1 CCT长度为597bp,测序结果与已知序列吻合.重组子经酶切鉴定,获得PGEX-6P-3-CCT原核表达菌株,Western blot表明重组蛋白能被LMP1单克隆抗体特异结合.获得约51kDa的PGEX-6P-3-CCT融合蛋白,分离纯化出约21kDa的LMP1 CCT蛋白.结论成功获得EBV LM1 CCT蛋白,为研究LMP1致瘤机制,研制生物抗癌药物奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马桂璋	广州医学院微生物学与免疫学教研室	16	73	4.0	7.0
2	张雪雁	广州医学院微生物学与免疫学教研室	13	23	3.0	4.0
3	杨英	广州医学院微生物学与免疫学教研室	12	48	4.0	6.0
4	汤郡	广州医学院微生物学与免疫学教研室	9	65	4.0	8.0