逆转录病毒介导的人NT-3在嗅神经鞘细胞中的表达及活性检测

• 作者: 杨浩 游思维 王春婷 金卫林 鞠躬
• 来源期刊: 实验生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 神经营养素-3逆转录病毒载体 嗅神经鞘细胞 细胞培养 背根神经节 基因治疗
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 页码范围: 5-12
• 页数: 8页
• 分类号: Q42
• 字数: 5168字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-520X.2003.01.002

摘要

本文构建了pRev-TRE-NT-3的逆转录病毒表达载体,通过Ecopack293细胞将其与pRev-Tet-On分别进行包装,制备了重组缺陷型的hNT-3和Tet-on逆转录病毒,用这两种病毒感染原代培养大鼠嗅神经鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs),并经强力霉素(Dox)诱导,获得Dox浓度依赖性hNT-3表达的OECs,最后经过Western-Blot检测hNT-3的表达以及通过DRG与NT-3转染后OECs联合培养来对表达的hNT-3活性进行鉴定,结果:(1)hNT-3-pcDNA的多克隆位点,用EcoRⅠ和HindⅢ酶切,PCR扩增,再用Sall和HindⅢ切下全长编码的hNT-3 cDNA,定向连接到pRev-TRE上,pRev-TRE全长为6.5kb,NT-3全长为0.78kb,pRev-TRE-NT-3重组体经过鉴定,确认插入子的方向和完整性,结果与预期相符.(2)hNT-3修饰的OECs培养上清经Westernblot检测,与hNT-3抗体结合的蛋白条带分子量约为28kd,hNT-3修饰过的OECs上清表达量明显高于未转染组OECs的表达量,且hNT-3表达量与Dox浓度有依赖性.(3)与hNT-3修饰的OECs联合培养背根神经节(dorsal root ganglion,DRG),有许多DRG细胞向外迁移,这些细胞折光性强,突起较长而纤细,并形成复杂的网络.而未修饰的OECs组,只有少量的细胞迁移生长,细胞迁移和突起生长都很局限,空白对照组的DRG没有向外迁移的细胞和向外延伸的突起;且对照组的突起生长长度明显比NT-3修饰的实验组短(P＜0.01).这些结果表明,Tet-On调控NT-3表达在OECs转染成功,为进一步体内移植修复损伤提供了理想的材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王春婷	第四军医大学神经科学研究所	25	260	7.0	15.0
2	鞠躬	第四军医大学神经科学研究所	188	1218	17.0	24.0
3	杨浩	第四军医大学神经科学研究所	54	391	11.0	17.0
4	游思维	第四军医大学神经科学研究所	67	518	13.0	20.0
5	金卫林	第四军医大学神经科学研究所	24	163	7.0	11.0