地衣芽孢杆菌GXN151的纤维素酶基因cel12A的序列分析及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 冯家勋 刘永生 唐纪良 张成刚 柏学亮 段承杰 赵广存 马庆生
• 来源期刊: 广西农业生物科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 地衣芽孢杆菌 家族12糖基水解酶 纤维素酶 大肠杆菌中表达
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术专栏
• 页码范围: 194-200
• 页数: 7页
• 分类号: Q786|Q751
• 字数: 3797字
• 语种: 中文

摘要

地衣芽孢杆菌菌株GXN151的cel12A基因为783 bp,可编码含261个氨基酸的羧甲基纤维素酶Cel12A,Cel12A的N-末端第1～28氨基酸具典型的信号肽特征、第9～31氨基酸具跨膜功能域特征、第104～261氨基酸形成家族12糖基水解酶(glycosyl hydrolase)功能域.将编码其第73～261氨基酸的DNA序列克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)得表达质粒pGXN12A,用1 mmol/L IPTG诱导处理JM109(DE3)/pGXN12A 的培养液6 h pGXN12A的表达量达到最高,在JM109(DE3)和BL21(DE3)pLysS中该表达蛋白质可分别占菌体胞内总蛋白的54.3%和20.9%.在含羧甲基纤维素的LA平板上JM109(DE3)/pGXN12A和BL21(DE3)pLysS/pGXN12A表现有较弱的羧甲基纤维素酶活性,说明重组的Cel12A的催化功能域具有独立的催化活性.包含体检测表明pGXN12A在JM109(DE3)中的表达产物大部分形成不溶性包含体.