应用滤纸吸附-PCR法和改进的亚克隆方法快速筛选克隆甜橙细胞壁酸性转化酶基因(CS-CWI)

• 作者: 安新民 张上隆 徐昌杰 陈俊伟 陶俊
• 来源期刊: 细胞生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 滤纸吸附 PCR筛选文库 亚克隆
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 59-62
• 页数: 4页
• 分类号: Q94
• 字数: 3054字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7666.2003.01.015

摘要

根据GenBank中已知的植物细胞壁转化酶基因的保守区序列设计一对PCR引物,分别以滤纸(吸附有甜橙基因组噬菌体文库LB平板的噬茵体)和Top agarose(滤纸吸附后的LB平板)的SM洗脱液为模板,仅通过7次PCR就快速、准确、经济地筛选出CSCWI阳性克隆.提取该阳性克隆的DNA并进行BamH I和HindⅢ双酶切,通过PCR方法鉴定阳性酶切条带并回收,利用TaqDNA聚合酶的聚合活性和3'末端转移酶活性,改变该片段使其含有3'腺苷酸(A)突出末端,与pUCm-T载体实现了高效连接.阳性噬茵斑克隆及阳性条带的正确性得到测序的验证,表明滤纸吸附-PCR法和改进的亚克隆方法可正确和高效地应用于PCR筛选文库和亚克隆.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陶俊	浙江大学华家池校区园艺系	106	1479	17.0	36.0
3	张上隆	浙江大学华家池校区园艺系	94	5232	39.0	70.0
4	陈俊伟	浙江大学华家池校区园艺系	15	849	10.0	15.0
7	徐昌杰	浙江大学华家池校区园艺系	58	1989	23.0	44.0
8	安新民	浙江大学华家池校区园艺系	10	520	7.0	10.0