表达绿色荧光蛋白的伪狂犬病毒Bartha-K61株TK-突变株的构建

• 作者: 宋建兰 范伟兴 赵宏坤 陈溥言 魏荣
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病毒Barth K61株 TK基因 EGFP基因 TK基因缺失 转移载体 重组病毒
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 476-482
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4598字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2003.05.014

摘要

提取伪狂犬病毒(PRV)Bartha K61株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的PRV Ka-plan株UL区UL25、UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R),L包括部分UL25、全部UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因内部缺失270个核苷酸.将L片段和R片段克隆于pBluescript M13-载体上,获得pSKLR;再将绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1上含GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入pSKLR的L片段和R片段之间构成转移载体pSKLRG.提取pSKLRG质粒,经单酶切线性化后用脂质体与PRV Bartha-K61株共转染143TK-细胞,在细胞培养液中有5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)存在的条件下筛选出表达绿色荧光蛋白的重组PRV Bartha-K61毒株:PRV rBGFP.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈溥言	南京农业大学动物医学院	269	2875	28.0	40.0
2	赵宏坤	山东农业大学动物科技学院	109	1204	18.0	28.0
3	范伟兴	山东农业大学动物科技学院	26	253	12.0	15.0
4	魏荣	南京农业大学动物医学院	7	64	5.0	7.0
5	宋建兰	山东农业大学动物科技学院	4	35	3.0	4.0