对鳞翅目害虫高毒力的Bt cry1Aa基因的分离克隆及表达

• 作者: 姚江 宋福平 张杰 李长友 胡玉琴 陈中义 黄大昉
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 苏云金芽孢杆菌 Ly30菌株 cry1Aa基因 克隆 表达 杀虫活性
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 毒理与抗性
• 页码范围: 150-155
• 页数: 6页
• 分类号: Q965.8
• 字数: 4874字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0454-6296.2003.02.004

摘要

Bt菌Ly30株是我国自行分离的对多种害虫具有高毒力的苏云金芽孢杆菌,经CAPS(cleaved amplified polymorphic se-quences)系统鉴定,它含有cry1Aa基因.以全长基因PCR产物的粘端定向克隆的方法,设计一对特异引物,分别引入NcoⅠ和BamHⅠ/Nco Ⅰ酶切位点.以Ly30质粒DNA为模板扩增cry1Aa全长基因,与表达载体pKK233-2相应酶切产物连接,转化大肠杆菌,获得含有cry1Aa基因重组质粒pKKLy1Aa.完成了该基因的亚克隆和序列测定,结果表明,该基因的编码区为3 531 bp,编码蛋白分子量为133.2 kD,含1176个氨基酸,等电点pI为4.99.该基因序列已在GenBank中登记注册,登录号为AF384211,并被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Aa12.对重组菌KKLy1Aa进行诱导表达研究.在0.6mmol/L IPTG、37℃、8 h培养条件下,该基因获得高效表达,SDS-PAGE电泳检测到明显的133.2 kD蛋白带.室内生测结果表明,Cry1Aa蛋白对不同的小菜蛾品系均有较高的杀虫活性,其LC50值分别为0.203μg/mL和0.554μg/mL.