抗真菌蛋白Rs-AFP2基因定点突变及其对大肠杆菌中表达的影响

• 作者: 刘柱 朱建清 杨志荣 胡新文
• 来源期刊: 高技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 萝卜抗真菌蛋白(Rs-AFP2),定点突变,密码偏爱性,表达
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 生物与现代农业技术
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 3163字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-0470.2003.04.004

摘要

为了研究遗传密码子对表达调控的影响,利用PCR重叠延伸法,对萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因编码序列区的部分核苷酸进行沉默突变,构建突变体Rs-AFPm.序列分析表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码的蛋白由29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白组成.突变体与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差一个碱基(CAG→CAA),第6号稀有密码子Arg相差两个碱基(CAG→CGA).重新合成引物,将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因与原核表达载体pET-21b(+)分别重组到大肠杆菌BL21菌株.IPTG诱导后,二者均得到了表达.软件分析显示,突变前pETAFPo表达产物占全菌蛋白的3%,突变后pETAFPm的表达产物占全菌蛋白含量的8%;表达蛋白主要以包涵体的形式存在,包涵体经超声波破碎后,蛋白质复性,抑菌结果表明,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径.这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比,已有效地提高表达量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨志荣	四川大学生命科学学院	178	2296	26.0	37.0
2	胡新文	中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室	32	248	9.0	15.0
3	刘柱	四川大学生命科学学院	5	53	4.0	5.0