3种丙型肝炎病毒结构基因腺病毒载体穿梭质粒的构建鉴定及表达

• 作者: 冯志华 周永兴 曹义战 李谨革 王平忠 贾战生 郝春秋
• 来源期刊: 中国危重病急救医学
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 结构基因 腺病毒 表达载体 穿梭质粒
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 69-72
• 页数: 4页
• 分类号: Q786|R575.1
• 字数: 3227字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建能表达HCV不同结构基因(C、C+E1、C+E1+E2)的腺病毒表达载体的穿梭质粒,为进一步包装能高效表达HCV 不同结构蛋白的腺病毒载体做准备.方法:用分别含有Bgl Ⅱ及 Hind Ⅲ酶切位点的HCV不同片段结构基因上、下游引物,以含有HCV H 株基因序列的质粒pBRTM/HCV1-3011为模板,通过PCR扩增获得HCV 3种不同结构基因片段,基因片段回收后,分别以Bgl Ⅱ及 Hind Ⅲ双酶切,定向插入到腺病毒穿梭质粒pAd.CMVLink.1中CMV启动子下游Bgl Ⅱ与 Hind Ⅲ位点之间,获得3种重组腺病毒穿梭质粒pAd.HCV-C、 pAd.HCVCE1和 pAd.HCV-S(C+E1+E2).通过Bgl Ⅱ/Hind Ⅲ双酶切、聚合酶链反应(PCR)及插入片段序列测定对质粒进行了三重鉴定,以抗HCV C单克隆抗体为一抗,利用间接免疫荧光法及Western Blot检测了3种穿梭质粒在HepG2细胞中的瞬时表达.结果:酶切、PCR及测序鉴定证实,3种穿梭质粒的插入片段分别为HCV C、C+E1和C+E1+E2区基因片段,免疫荧光及Western Blot法检测表明其可以在HepG2细胞中瞬时表达.结论:构建的3种腺病毒穿梭质粒分别可以表达HCV 不同段的结构基因,为包装表达HCV不同结构基因的腺病毒载体奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹义战	第四军医大学唐都医院急诊科	74	603	14.0	20.0
2	郝春秋		1	2	1.0	1.0
3	冯志华		1	2	1.0	1.0
4	周永兴		1	2	1.0	1.0
5	李谨革		1	2	1.0	1.0
6	贾战生		1	2	1.0	1.0
7	王平忠		1	2	1.0	1.0