用甲醇酵母表达经基因优化的HPV 6型L1蛋白

• 作者: 周玲 张晓光 曾毅 李平川
• 来源期刊: 中华实验和临床病毒学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乳头状瘤病毒,人 蛋白,L1 毕赤酵母 基因,结构
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 310-314
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4722字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2003.04.002

摘要

目的利用甲醇酵母系统Pichia pastoris高效表达HPV 6型L1蛋白.方法按照Pichia pastoris偏爱密码子合成L1全长基因,构建pPIC3.5K- HPV6- L1表达载体,转化KM71,经组氨酸缺陷的MD培养基和G418筛选,PCR 确认L1基因整合,使用BMGY/BMMY培养/诱导目的基因的表达.结果筛选到3株阳性表达克隆,Western blot显示表达产物有部分糖基化现象,使用能识别完整VLP的单抗进行间接免疫荧光检测提示L1蛋白在Pichia细胞内以空间构象形式存在.通过离子交换和亲和层析两步纯化从1L发酵液中得到125 μg纯的L1蛋白.结论通过基因优化在甲醇酵母中表达HPV6- L1蛋白,这将为结构与功能研究以及疫苗开发提供条件.