HPV16 L1在整合型重组毕赤酵母中的表达及病毒样颗粒的纯化

• 作者: 冯娟 张丽芳 李文姝 田晓娟 薛向阳
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒 主要衣壳蛋白L1 毕赤酵母表达系统 病毒样颗粒
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 479-483
• 页数: 5页
• 分类号: R373
• 字数: 3295字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.05.010

摘要

目的 构建可稳定表达HPV16 L1的整合型重组毕赤酵母,并纯化自主组装成的HPV16 L1病毒样颗粒(VLPs).方法 根据酵母密码子偏爱性优化HPV16 L1基因并克隆到pPIC3.5K表达载体,构建pPIC3.5K/HPV16 L1重组质粒;重组质粒经Bgl Ⅱ酶切线性化后,电转化至GS115菌株中,筛选HPV16 L1重组毕赤酵母.阳性整合菌株甲醇诱导后,以HPV16 L1单克隆抗体检测目的蛋白表达;采用肝素亲和层析法纯化HPV16 L1VLPs并进行透射电镜观察.结果 PCR、酶切和测序分析表明成功构建了pPIC3.5K/HPV16 L1重组质粒.成功构建的HPV16 L1重组毕赤酵母甲醇诱导后,Western blot证实重组酵母菌裂解产物存在HPV16 L1目的蛋白.肝素亲和纯化后,透射电镜观察到了直径大约55 nm的VLPs,其形态与HPV16天然病毒颗粒相似.结论 利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功表达了HPV16L1蛋白,并用肝素亲和纯化可快速获得结构完整的HPV16 L1VLPs,为HPV16预防性疫苗的研制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯娟		3	9	2.0	3.0