人CTLA4胞外区突变体在毕赤酵母中的高效表达

• 作者: 代飞 吴军 张小容 易绍萱 贺伟峰 陈希炜
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: CTLA4 PCR定点突变 毕赤酵母 分泌表达
• 年，卷（期）: 2003,（21）
• 所属期刊栏目: 专题报道:移植免疫
• 页码范围: 1902-1905
• 页数: 4页
• 分类号: R394-33|R394.3|R379
• 字数: 2485字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2003.21.009

摘要

目的根据毕赤酵母密码子偏好,设计并改造人CTLA4胞外区cDNA,构建毕赤酵母分泌型表达载体,以实现人CTLA4胞外区蛋白在毕赤酵母中的高效表达.方法利用PCR定点突变技术,将人CTLA4胞外区cDNA中的毕赤酵母低频使用密码子突变成高频使用密码子而不改变其氨基酸序列;经DNA序列测定证实后插入毕赤酵母高拷贝表达载体pPIC9K а分泌信号下游,SacⅠ线性化后电转GS115;G418梯度筛选转化菌;PCR鉴定目的基因整合;甲醇诱导表达,SDS-PAGE、Western blotting、肽质量指纹等鉴定表达蛋白.结果成功地对人CTLA4胞外区cDNA进行了定点突变,该突变体在毕赤酵母中能成功表达CTLA4胞外区蛋白.结论为高效表达人CTLA4胞外区蛋白及其功能研究和临床应用奠定了基础.