人纤溶酶原kringle区缺失突变体的毕赤酵母表达、产物纯化及鉴定

• 作者: 宋后燕 宋钢 张艳玲 莫炜 陈武
• 来源期刊: 广东药学院学报
• 学科: 工学
• 关键词: 毕赤酵母 kringle区 纤溶酶原 缺失突变体 纯化
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 299-303
• 页数: 5页
• 分类号: TQ92
• 字数: 3735字
• 语种: 中文

摘要

目的 研究人纤溶酶原 kringle 区缺失突变体(PLGΔK)的毕赤酵母(Pichia pastoris)表达、产物纯化及理化性质鉴定.方法 采用7.5 L发酵罐对工程菌 PLGΔK/GS115 进行高密度培养、甲醇诱导表达,培液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶滤过、透析后冷冻干燥.等电聚焦电泳、HPLC、质谱分别检测 PLGΔK 等电点、纯度和分子量;纤维蛋白平板、肽底物S-2403 分别测定PLGΔK 激活后的纤维蛋白和酰胺水解活性.结果 7.5 L高密度发酵可获得约为400 mg/L培液的表达量,经三步纯化后制备的PLGΔK纯度大于96%.理化分析显示PLGΔK的等电点为7.5～7.8,分子量:27.787 kD,比活性:23.6 U/mg.结论 初步建立了PLGΔK的酵母高密度发酵及纯化工艺,所制备半成品活性与血浆提取的PLG相近,具备放大生产和应用的潜力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋后燕	复旦大学分子医学教育部重点实验室	94	467	12.0	17.0
2	莫炜	复旦大学分子医学教育部重点实验室	22	92	6.0	9.0
3	陈武	广东药学院生命科学与生物制药学院	5	15	2.0	3.0
4	张艳玲	复旦大学分子医学教育部重点实验室	3	29	2.0	3.0
5	宋钢	复旦大学分子医学教育部重点实验室	2	6	2.0	2.0