人纤溶酶原K5突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化

• 作者: 刘祖国 周世豪 李朝阳 李民友 杨中汉 蔡卫斌 骆晓枫 高国全
• 来源期刊: 中山大学学报(医学科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 纤溶酶原 突变型K 5 血管增生抑制因子 突变 基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 241-244
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 3108字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2004.03.012

摘要

[目的]构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1),在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础.[方法]以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5mutl基因,将其克隆进表达载体pET-22b(+)中,并用限制性核酸内切酶酶切和DNA测序鉴定其连接正确;pET-22b(+)/K5 mut1转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物用固化Ni2+-His Bind Resin亲和层析方法纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot方法分析鉴定.[结果]PCR扩增获得258 bp的人纤溶酶原K5 mutl基因片段,正确插入pET-22 b(+)载体,在大肠杆菌中该基因编码蛋白的表达量占菌体总蛋白13%左右;SDS-PAGE显示其相对分子质量M1≈14.1×103,Western blot证实该表达蛋白为K5 mut1重组蛋白,经亲和层析后K5 mut1重组蛋白纯度大于90%,获得率约为10 mg/L.[结论]成功构建人纤溶酶原K5 mut1,实现在大肠杆菌中高效表达,亲和层析纯化获得较高纯度K5 mut1重组蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘祖国	中山大学中山眼科中心	52	730	16.0	25.0
2	骆晓枫	中山大学基础医学院生化教研室	25	172	7.0	12.0
3	蔡卫斌	中山大学基础医学院生化教研室	10	150	6.0	10.0
4	李朝阳	中山大学中山眼科中心	20	114	6.0	9.0
5	杨中汉	中山大学基础医学院生化教研室	10	68	5.0	8.0
6	周世豪	中山大学基础医学院生化教研室	5	60	4.0	5.0
7	李民友		1	9	1.0	1.0