人纤溶酶原K5突变体在大肠杆菌中的优化表达

• 作者: 刘祖国 李明友 李朝阳 杨中汉 杨霞 温南 蔡卫斌 高国全
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人纤溶酶原K5 缺失突变体 血管新生 优化表达
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 技术研究
• 页码范围: 221-225
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 字数: 4014字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2008.02.023

摘要

[目的]提高K5突变体(mK5)在原核系统的单位表达量.[方法]调整可能影响表达的参数:抗生素浓度、pH、A600值、IPTG终浓度、诱导时间、诱导温度,同时固定其它参数.通过电泳分析,获得mK5在原核系统pET22b-BL21的最优表达条件:组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得mK5蛋白,SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定mK5蛋白;MTT法分析mK5对人视网膜毛细血管内皮细胞(HRCEC)增殖的影响.[结果]优化后的表达条件为:最适细菌培养温度为37℃,最佳抗生素浓度为50 μg/mL羧苄青霉素,最适pH值为7.0,在A600为0.9～1.0时加入终浓度为1.0 mmol/L的IPTG为最佳诱导条件,37℃诱导10 h为最佳诱导时间;优化条件后inK5纯化蛋白得率为21 mg/L,产量较优化前(15 mg/L)提高近30%;inK5特异性地抑制HRCEC的增殖,IC50=40 nmol/L.[结论]本研究确定了mK5蛋白诱导表达的最适参数,并获得具有生物活性的高纯度、高表达量的重组蛋白.为工业化大规模发酵生产提供了基本参数.