人源性大肠癌cDNA噬菌体库的构建及PCR鉴定

• 作者: 刘宇虎 崔海宏 张振书 武金宝 王亚东 钟东
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结肠直肠肿瘤 噬菌体 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2003,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 608-610
• 页数: 3页
• 分类号: R735
• 字数: 2895字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2003.07.016

摘要

为构建人源性大肠癌cDNA噬菌体表达文库,从人大肠癌组织中提取总RNA,纯化mRNA,用RT-PCR反转录合成cDNA第一链,用LD-PCR合成cDNA第二链,除去小于500bp的小片段,与λTriplEx2噬菌体连接,体外包装.转化E.coli XL1-blue大肠杆菌,滴定文库的滴度,用IPTG和X-gal测定重组率.用PCR鉴定插入cDNA片段大小.构建成含2.07×106pfu/ml重组子的人大肠癌cDNA噬菌体表达文库,重组率为94.5%,插入外源cDNA片段大小从600bp～4kb,平均约1.4kb.文库合符要求,适合于大批量筛选cDNA克隆的大肠癌相关抗原基因.