人源性天然噬菌体展示文库的构建及鉴定

• 作者: 年四季 王栩 袁青 邬于川 黄黎
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 单链抗体 噬菌体抗体文库 重叠延伸PCR
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 544-547
• 分类号: R392.11
• 字数: 4085字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2010.06.014

摘要

目的:构建人源性天然噬菌体展示文库并对文库进行鉴定.方法:从未经主动免疫健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA,用直接PCR及半巢式PCR扩增人抗体重链(VH)及轻链(Vκ和Vλ)可变区基因.采用改进的重叠延伸PCR法将VH基因和VL(Vκ和Vλ)基因连接成人单链抗体(scFv)基因,并将scFv文库基因克隆到噬菌体载体pCANTAB-5E中,电转化E.coli TG1,构建单链抗体文库.结果:采用直接PCR和半巢式PCR扩增得到42条VH基因片段,16条Vκ基因片段,18条Vλ基因片段.混合的VH和VL等摩尔比连接后,产生的单链抗体文库基因大小为750 bp左右;转化后构建了文库容量为1.35×108的单链抗体文库.BstN Ⅰ酶切分析文库中的单链抗体基因结果显示,酶切得到的scFv指纹图谱均不相同.结论:构建的抗体文库多样性好,可用于多种人源性单链抗体的筛选.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁青	四川省泸州医学院基础医学院	4	21	3.0	4.0
2	年四季	四川省泸州医学院基础医学院	4	21	3.0	4.0
3	黄黎	四川省泸州医学院基础医学院	3	11	2.0	3.0
4	王栩	四川省泸州医学院基础医学院	2	10	2.0	2.0
5	邬于川	四川省泸州医学院基础医学院	2	23	2.0	2.0