用PCR技术从cDNA文库中获取目的基因长片段

• 作者: 余科科 李俊 汪思应 程洁 许望翔 郑红
• 来源期刊: 安徽医药
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因 实验方法 PCR
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 实验方法学
• 页码范围: 58-60
• 页数: 3页
• 分类号: Q7
• 字数: 1776字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-6469.2003.01.036

摘要

目的建立一种简便有效的获取cDNA大片段的实验技术.方法应用PCR原理,设计特异引物结合文库载体引物对大鼠胎肝cDNA文库进行PCR扩增;用随机引物标记法标记已知小片段"目的基因"(300bp±)作为探针,对PCR产物进行Sorthern杂交以检验"目的基因"片段的正确性及长度;回收"目的基因"片段并连接人PGEM-T载体,转染JM109并扩增后,提取"目的基因"测序.结果琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增产物有多条不同长度的段,Sorthern杂交发现一段长度为1.5kb的cDNA片段为"目的基因";测序结果与GeneBank进行Blaste分析,该基因为一株新的序列,已在GeneBank中登录注册(Rat Liver Regeneration-relatedProtein 1,RLRP-1 AF236054).结论应用PCR结合Sorthern杂交等手段可迅速从cDNA文库中获取长片段目的基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李俊	安徽医科大学临床药理研究所	493	5712	35.0	53.0
2	汪思应	安徽医科大学病理生理学教研室	131	558	11.0	15.0
3	许望翔		20	154	6.0	12.0
4	郑红	安徽医科大学病理生理学教研室	36	156	8.0	10.0
5	程洁	安徽医科大学病理生理学教研室	17	88	5.0	8.0
6	余科科	安徽医科大学病理生理学教研室	15	62	6.0	7.0