常规PCR与RACE结合法快速从cDNA文库中克隆基因

• 作者: 印莉萍 戚金亮 王丽 韩振海 马小娟
• 来源期刊: 首都师范大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: PCR,RACE,cDNA克隆,cDNA文库,Fe(Ⅱ)-转运蛋白基因
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 页码范围: 55-59
• 页数: 5页
• 分类号: Q74
• 字数: 4550字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-9398.2004.01.013

摘要

首先根据FE(Ⅱ)-转运蛋白基因家族的保守区设计同源的常规PCR引物(F1,R1),扩增出490bp的特异片段.然后根据RACE法原理,巧妙地设计3′RACE(F2)和5′RACE(R3)特异性引物,使两者既能分别与文库载体上的筛选扩增引物配对扩增cDNA 3′和5′末端序列,又能使扩增出的3′RACE和5′RACE产物序列有重叠部分;另外设计引物时还兼顾到使F2和R3也能配对,从而能对3′RACE和5′RACE扩增产物进行双特异性引物常规PCR鉴定.该方案不但能够直接根据序列鉴定3′RACE和5′RACE产物是否为同一基因序列,还能快捷地用常规PCR鉴定3′RACE和5′RACE扩增产物是否为特异性扩增,避免了对非特异性扩增产物的克隆测序等繁琐的鉴定过程,优化了基因克隆策略.最后根据拼读出的全长序列设计引物(F4,R4)扩增出完整编码区.应用该方法成功地从小金海棠缺铁处理的根系cDNA文库中克隆了 Fe(Ⅱ)-转运蛋白基因的 cDNA.说明该方案是一种从cDNA文库中克隆目的基因的快捷优化方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩振海	中国农业大学农学与生物技术学院果树分子生物学实验室	156	3213	31.0	48.0
2	印莉萍	首都师范大学生物系遗传与生物工程重点实验室	66	896	17.0	27.0
3	王丽	首都师范大学生物系遗传与生物工程重点实验室	21	116	5.0	10.0
4	戚金亮	中国农业大学农学与生物技术学院果树分子生物学实验室	6	79	6.0	6.0
8	马小娟	首都师范大学生物系遗传与生物工程重点实验室	4	49	3.0	4.0