动物细胞双顺反子高效稳定表达系统建立

• 作者: 吴翠玲 孙奋勇 林珊莉 黄立强
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 双顺反子 中国仓鼠卵细胞 二氢叶酸还原酶
• 年，卷（期）: 2004,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 52-55
• 页数: 4页
• 分类号: Q81
• 字数: 2598字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2004.10.012

摘要

建立稳定高效的动物细胞表达系统对于许多重组蛋白质药物的工业化生产有着十分重大的意义.用PCR扩增得到dhfr基因,克隆入载体pIRESneo3基因以替换原有的neor基因,并将hbFGF作为报告基因插入其多克隆位点,得到重组子pIRESdhfr-hbFGF,转导CHO细胞后,MTX浓度梯度筛选稳定表达hbFGF的细胞株,ELISA与Western Blot检测培养基中hbFGF的分泌表达.结果发现10、100、1000nmol/L MTX组均检测到hbFGF的表达,其中表达量最高的一株细胞传代20次后表达量仍能维持较高的水平.因此利用双顺反子表达系统可以实现外源基因在动物细胞中的高效稳定表达.