牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定

• 作者: 刘建宁 吴盛 孙自勇 汪晶 田鹏鹏 陈均勇 陈新园
• 来源期刊: 南京大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 肠激酶 分泌表达 酶切 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 蛋白质多肽药物制造与临床前研究专栏
• 页码范围: 41-48
• 页数: 8页
• 分类号: Q78
• 字数: 4063字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0469-5097.2004.01.006

摘要

用RT-PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,Enterokinase Light Chain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichia pastoris GS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn-Sepharose亲和层析一步纯化,从每升培养液可获得1.6 mg EKLC,其纯度达90%以上.酶反应动力学结果表明,EKLC对小分子底物Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-β-naphthylamide的Km为(753±42)mol/L,kcat为(31.5±3.8)s-1.对硫氧化还原蛋白-脑钠素融合蛋白(Trx-hBNP)的酶解作用显示,当酶与底物重量比大于1:100时,经37℃保温5 h后,超过75%的融合蛋白被裂解.上述结果表明,EKLC能够特异识别并水解Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-肽键,是一种能将融合蛋白中目标蛋白与载体蛋白裂解释放的有效工具酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘建宁	南京大学分子医学研究所	31	169	7.0	12.0
2	孙自勇	南京大学分子医学研究所	17	93	6.0	9.0
3	吴盛	南京大学分子医学研究所	5	58	3.0	5.0
4	陈均勇	南京大学分子医学研究所	8	38	3.0	6.0
5	陈新园	南京大学分子医学研究所	8	32	2.0	5.0
6	田鹏鹏	南京大学分子医学研究所	5	59	4.0	5.0
7	汪晶	南京大学分子医学研究所	4	26	2.0	4.0