正义、反义MCP-1基因逆转录病毒载体重组质粒的构建和包装

• 作者: 何小解 何庆南 周钢 张新萍 易著文 朱敏
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 单核细胞趋化蛋白-1 逆转录病毒 基因转染
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 237-241
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4140字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7847.2004.03.007

摘要

为构建含单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)基因的重组逆转录病毒pLXSN/MCP-1质粒.用RT-PCR技术从大鼠系膜细胞中扩增出MCP-1全长DNA,将其与Pgem-TE连接,用限制性内切酶EcoRⅠ对pTE-MCP-1和逆转录病毒质粒pLXSN分别进行酶切.在T4连接酶的作用下,构建重组逆转录病毒质粒pLXSN/MCP-1.经BglⅡ,Xho Ⅰ酶切鉴定MCP-1在质粒中的方向,用脂质体介导的方法把重组质粒DNA转染进入包装细胞PA317中,经过G418筛选出抗性克隆.通过NIH3T3细胞测定病毒液的病毒滴度.结果证实经过RT-PCR技术从大鼠系膜细胞中扩增出MCP-1全长DNA与所需的大小一致.重组质粒经酶切分析与预期的结果一致.G418筛选出抗性克隆,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒.NIH3T3细胞测定病毒滴度为17×104cfu/mL.