禽流感病毒H5HA、H7HA基因共表达核酸疫苗质粒的构建及其在体外的表达

• 作者: 刘光亮 姜永萍 张芳芳 陈化兰 陈怀涛
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 双顺反子 重组质粒 核酸疫苗 真核表达 间接免疫荧光
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 107-110
• 页数: 4页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 2238字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2004.04.034

摘要

为了获得既能对H5亚型又能对H7亚型AIV攻击产生保护的核酸疫苗,设计构建了含有双顺反子的真核表达载体,用限制性内切酶从PCIH7HA载体上切得AIV H7HA基因的cDNA,此cDNA含有CMV启动子和Poly(A)终止序列,使用DNA连接酶引入载体PCIH5HA中,最后获得双顺反子真核表达载体PCI-H5HA-H7HA,其中H5HA和H7HA基因都带有自己的CMV启动子和Poly(A)终止序列.选用293-T真核表达细胞系,用脂质体转染法导入细胞进行瞬时表达,转染后48 h用荧光标记的兔抗鸡IgG进行间接免疫荧光试验.结果表明双顺反子真核表达载体构建正确,且在真核表达细胞系中H5HA和H7HA基因都能获得表达,且H5HA基因的表达效果优于H7HA.这为进一步的动物免疫试验和疫苗效价检测试验奠定了基础.