猪瘟流行毒株E2基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建

• 作者: 吴发兴 季新成 张彦明 张燕霞 李晓成 许信刚 陈杰 黄保续
• 来源期刊: 中国兽医科技
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 E2基因 杆状病毒表达系统 载体构建
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 41-44
• 页数: 4页
• 分类号: S852.651
• 字数: 2716字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2004.01.009

摘要

用RT-PCR方法扩增了陕西省近期猪瘟流行野毒株E2基因,并将其克隆到pMD 18-T载体;经转化、筛选、鉴定后,测定了核苷酸序列,根据C株、Brescia株和Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行gp55氨基酸序列推导,并进行同源性比较.结果表明,该猪瘟流行毒株的E2核苷酸序列与C株、Brescia株和Alfort株的E2核苷酸序列同源性分别为81.9%、83.4%和83.5%;相应地,gp55氨基酸同源性分别为94.8%、95.6%和95.3%.将此E2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb后获得了重组质粒 pFBHT-E2,进而转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用;经抗性及蓝白斑筛选得到了含E2基因的重组DNA,将其命名为rBacmid-E2.此研究为进一步在昆虫细胞中表达E2基因、开发研制猪瘟基因工程疫苗奠定了基础.