增强型绿色荧光蛋白基因转染及TGFβ3诱导前软骨干细胞向成软骨方向分化

• 作者: 游洪波 陈安民
• 来源期刊: 中华小儿外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 荧光抗体技术 软骨形成
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 545-549
• 页数: 5页
• 分类号: R72
• 字数: 5159字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2004.06.019

摘要

目的探讨增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)转染前软骨干细胞(PSCs)的效果及TGFβ3诱导PSCs向成软骨方向定向分化的可行性.方法利用磁性细胞分选系统分离纯化有成纤维细胞生长因子受体-3(FGFR-3)表面标志的PSCs.采用脂质体介导法将EGFP基因转染PSCs,G418筛选得到EGFP基因修饰PSCs.用免疫组化及免疫荧光检测EGFP基因修饰PSCs的FGFR-3表达.采用藻酸盐凝胶培养,以TGFβ3诱导分离纯化的PSCs向成软骨方向定向分化.应用免疫组化、RT-PCR检测PSCs向成软骨方向分化过程中特异性软骨基质成分的表达情况.结果 EGFP基因转染PSCs后,24 h GFP开始表达,48～72 h GFP表达最强.G418筛选后,EGFP基因修饰PSCs体外培养6周仍有较强GFP表达.在含TGFβ3的藻酸盐凝胶培养7、14、21 d均有II型胶原表达;诱导21 d的PSCs免疫组化检测可见细胞及周围均有X型胶原、Aggrecan、COMP表达; RT-PCR检测显示在培养早期(8 d内)开始出现Aggrecan、X型胶原、COMP等的表达,中期(8 d后)开始出现II型胶原表达.结论 EGFP基因修饰PSCs在体外能长期稳定表达GFP,为应用组织工程技术修复骨骺损伤提供方便追踪观察的种子细胞.TGFβ3能诱导PSCs向成软骨方向定向分化.