逆转录病毒介导的小干扰RNA稳定抑制子LRP16基因表达

• 作者: 宋海静 李琦 李雪 母义明 赵亚力 郝好杰 韩为东
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: LRP16基因 逆转录病毒 小干扰RNA MCF-7细胞
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 326-329
• 页数: 4页
• 分类号: Q754|Q786
• 字数: 2336字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2004.04.003

摘要

RNA干涉是近年被广泛关注的一项技术,通过19～21 nt的双链核酸介导使靶基因mRNA特异降解,目前已被广泛应用于细胞水平的基因功能研究.通过沉默LRP16基因表达介绍一项利用逆转录病毒介导发夹环样小干扰RNA的策略.首先选择了LRP16基因mRNA翻译起始位点下游+374 nt和+668 nt位置分别作为小干扰RNA作用靶位点,通过设计21nt的反义序列,构建了pL374和pL668 2个以pLPC为骨架的逆转录病毒载体,针对绿色荧光蛋白序列构建pGFPi载体做阴性对照,茎环样结构小RNA由U6启动子驱动转录生成.3个载体分别与VSVG共转染293GP2细胞,包装假病毒,再分别感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定生成小干扰RNA的细胞.Northern blot实验表明pL374和pL668可分别将LRP16基因抑制90%和60%,为进一步研究LRP16基因功能奠定了基础.另外,首次将mU6启动子序列插入pLPC逆转录病毒载体骨架,将其改造为可介导发夹环样小干扰RNA产生的质粒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵亚力	解放军总医院基础医学研究所分子生物室	93	443	10.0	17.0
2	宋海静	解放军总医院基础医学研究所分子生物室	20	170	9.0	12.0
3	李琦	解放军总医院基础医学研究所分子生物室	46	267	9.0	14.0
4	郝好杰	解放军总医院基础医学研究所分子生物室	45	183	7.0	10.0
5	母义明	解放军总医院内分泌科	329	2074	22.0	31.0
6	韩为东	解放军总医院基础医学研究所分子生物室	113	744	13.0	23.0
7	李雪	解放军总医院基础医学研究所分子生物室	20	138	8.0	11.0