人LDLR基因的克隆及在Hepa1-6细胞中的表达

• 作者: 吕丽萍 王全立 王海平 詹林盛 贾帅争
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 低密度脂蛋白受体(LDLR) 克隆 基因表达 Hepa1-6细胞 质粒
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 212-214
• 页数: 3页
• 分类号: R512.6
• 字数: 2816字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2004.03.004

摘要

目的:从能感染HCV的人肝癌细胞HepG2中克隆出人LDLR基因,构建其真核表达质粒,并在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中进行表达.方法:从HepG2中提取总RNA,采取逆转录PCR(RT-PCR)方法得到人LDLR的cDNA.将获得的人LDLR基因克隆到真核表达载体pcDNA3中,进行酶切和序列鉴定.将重组质粒pcDNA3-hLDLR和空载体转入Hepa1-6,G418筛选,并用RT-PCR和FACS检测人LDLR基因转录和蛋白的表达.结果:人LDLR的cDNA已插入载体pcDNA3构建成真核表达质粒pcDNA3-hLDLR,双酶切和测序表明,克隆的人LDLR与已登录GenBank的序列存在核苷酸多态性,但编码的氨基酸序列完全一致,该序列的GenBank登录号为gi|21629647|gb|AY114155.1,并且真核表达质粒的构建正确.用脂质体介导的方法转入Hepa1-6后,用RT-PCR和FACS检测表明,细胞可表达人LDLR.结论:成功地构建了真核表达质粒pcDNA3-hLDLR,为进一步研究HCV和人LDLR的相互作用,以及建立可能的HCV细胞感染模型奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕丽萍	军事医学科学院野战输血研究所	21	68	5.0	7.0
2	贾帅争	军事医学科学院野战输血研究所	25	78	5.0	7.0
3	王全立	军事医学科学院野战输血研究所	126	899	16.0	25.0
4	詹林盛	军事医学科学院野战输血研究所	64	450	11.0	19.0
5	王海平	军事医学科学院野战输血研究所	32	78	5.0	7.0