HBx-siRNA快速筛选体系的建立和应用

• 作者: 倪勤 刘克洲 姚航平 李敏伟 爱德华 羊正纲 陈智
• 来源期刊: 浙江大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 发光蛋白质类 HBx 增强型绿色荧光蛋白 小干扰RNA 筛选
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 300-305,310
• 页数: 7页
• 分类号: R318.5
• 字数: 4831字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2004.04.006

摘要

目的:建立针对HBx的小干扰RNA(siRNA)快速筛选体系.方法:①构建HBx与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)N端融合表达质粒;②用一步PCR法,制备针对HBx mRNA的RNA多聚酶启动子-siRNA表达框(SEC);③将SEC转染HBx-EGFP瞬时表达的AD293细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察分析SEC对HBx-EGFP荧光表达的抑制效果,从而确定有效siRNA.结果:①成功构建HBx-EGFP融合表达质粒pHBx-EGFP,在瞬时表达细胞中,HBx-EGFP绿色荧光主要呈颗粒状,聚集在核膜与核膜外周或细胞浆;②共转染SEC能有效抑制HBx-EGFP的瞬时表达.与siHBx271相比,siHBx388是一高效siRNA位点,并且该位点与tRNAVal和H1启动子搭配更有效.结论:成功建立表达HBx的荧光蛋白报告体系,结合快速制备SEC的方法,可用于进行HBx有效siRNA及其最适搭配启动子的快速筛选.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘克洲	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	66	345	10.0	16.0
2	姚航平	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	94	547	12.0	17.0
3	李敏伟	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	31	322	13.0	17.0
4	羊正纲	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	11	54	4.0	7.0
5	倪勤	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	13	70	6.0	8.0
6	爱德华	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	1	7	1.0	1.0
7	陈智		1	7	1.0	1.0