稳定表达HBx的人肝细胞系7702的建立

• 作者: 乔录新 刘凯 庞丽君 时红林 王珊珊 石英 郭向华
• 来源期刊: 实用肝脏病杂志
• 关键词: HBVx蛋白 人正常肝-7702细胞 转染 体外
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 实验性肝炎
• 页码范围: 320-323
• 页数: 4页
• 字数: 3630字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5069.2020.03.005

摘要

目的 构建HBx表达载体,筛选可稳定表达HBx的人肝细胞(HL)-7702细胞系.方法 采用RT-PCR法扩增HBx基因片段,并将其连接至pIRES载体,经酶切和测序鉴定pIRES-HBx重组质粒序列.然后,分别采用Real-timePCR和Western blot技术检测验证重组质粒的正确性.最后,应用G418抗生素筛选稳定表达HBx的HL-7702细胞系.结果 经PCR扩增得到正确的HBx片段,成功构建pIRES-HBx质粒,将重组质粒转染HEK 293细胞和HL-7702细胞均实现了HBx过量表达;经免疫荧光法鉴定,我们获得了稳定大量表达HBx的HL-7702细胞系.结论 成功构建的pIRES-HBx表达载体能在HL-7702细胞稳定表达HBx,为后续研究提供了基础实验工具.