利用pSOS系统筛选靶向HBV病毒X基因的siRNA

• 作者: 任红 彭明利 曾春华 韦德芳 高健
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: pSOS 乙肝病毒 X基因 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 146-152
• 分类号: R3
• 字数: 4766字
• 语种: 中文

摘要

构建靶向乙肝病毒(HBV)X基因的真核表达载体pSOS-X-siRNA和pSOS-siRNA,转染肝癌细胞系HepG2和 HepG2.2.15,筛选和验证高效siRNA.设计4个靶向X基因siRNA,将siRNA和HBx基因插入载体pSOS得重组质粒pSOS-X-siRNA;pSOS-X-siRNA经Pac I酶切去除目的片段HBx后得pSOS-siRNA.将质粒pSOS-X-siRNA和pSOS-siRNA分别转HepG2和HepG2.2.15肝癌细胞株.荧光显微镜下观察HepG2细胞绿色荧光(GFP)减弱程度预估干扰效率.ELISA 检测HepG2.2.15细胞上清HBsAg、HBeAg表达,Western blotting检测胞内蛋白HBsAg、HBcAg表达,Real time PCR检测胞内HBs mRNA、HBx mRNA的转录.转染4 d后,siRNA4使HepG2细胞的GFP信号表达程度最低,为阴性对照的9%,预测其干扰效果最强.siRNA4使HepG2.2.15细胞转染后4 d上清的HBsAg蛋白表达为对照的(13.92±1.14)%(P<0.05)、HBeAg为(21.69±4.92)%(P<0.05),胞内的HBsAg、HBcAg蛋白表达量灰度比值为0.175±0.025 、0.0825±0.028,均为各处理组中最低(P<0.01),HBs mRNA和HBx mRNA分别降为对照的0.237±0.028(P<0.01)、0.110±0.022(P<0.01),差异有统计学意义,证实 siRNA4为高效干扰位点.利用pSOS成功筛选并验证构建靶向HBV X基因的siRNA 靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	任红	重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	240	1961	23.0	35.0
2	彭明利	重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	31	193	7.0	12.0
3	高健	重庆医科大学附属第二医院消化科	11	195	6.0	11.0
4	韦德芳	重庆医科大学附属第二医院消化科	2	5	1.0	2.0
5	曾春华	重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	2	13	1.0	2.0