靶向S1P2基因的siRNA有效片段慢病毒载体的筛选

• 作者: 夏纪毅 姜睿 晏萧 朱永生 程波
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 自发性高血压大鼠 1-磷酸鞘氨醇受体2 小干扰RNA 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 1338-1344
• 页数: 7页
• 分类号: R698|R393|Q-33
• 字数: 5305字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2017.07.031

摘要

目的: 筛选能显著抑制原代培养的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR) 阴茎海绵体平滑肌细胞内1-磷酸鞘氨醇受体2(sphingosine-1-phosphate receptor 2,S1P2)基因表达的siRNA慢病毒载体.方法: SHR及SD大鼠各5只用于原代培养阴茎海绵体平滑肌细胞并分成6组,每组5个样本,每个样本约1.0×105个细胞,分别为携带靶向S1P2基因的siRNA-1~3号靶点的SHR慢病毒转染组(SHR siRNA-1、SHR siRNA-2和SHR siRNA-3组)、 携带慢病毒空载体的SHR转染组(SHR GFP组)、SHR未转染对照组(SHR control组)和SD大鼠对照组(SD control组).将靶向S1P2的siRNA片段的慢病毒载体,以感染复数(MOI)=60转染各组SHR阴茎海绵体平滑肌细胞,于转染72 h后荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况,用Western blot分析各组S1P2、ROCK1、ROCK2和eNOS在阴茎海绵体平滑肌细胞内的表达变化,RT-PCR检测各组阴茎海绵体平滑肌细胞S1P2、ROCK1和ROCK2的mRNA 的表达.结果: 荧光显微镜下观察SHR siRNA-1、SHR siRNA-2、SHR siRNA-3和SHR GFP组细胞转染效率均>80%;SHR GFP组与SHR control组相比,S1P2、ROCK1和ROCK2的mRNA和蛋白表达无明显差异, SHR siRNA-1、SHR siRNA-2、SHR siRNA-3和SD control组均显著低于SHR control组(P<0.05).而SHR siRNA-1、SHR siRNA-2、SHR siRNA-3和SHR GFP组eNOS蛋白表达与SHR control组相比均无显著差别,但SD control组显著高于SHR control组(P<0.05).结论: 3组针对S1P2的siRNA慢病毒载体均能显著抑制SHR阴茎海绵体平滑肌细胞内S1P2的表达,下调ROCK1和ROCK2表达,其中靶向S1P2的siRNA-1抑制效率最高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜睿	西南医科大学附属医院泌尿外科	19	32	4.0	4.0
2	晏萧	西南医科大学附属医院泌尿外科	1	0	0.0	0.0
3	夏纪毅	西南医科大学附属医院医学实验中心	12	39	5.0	5.0
4	程波	西南医科大学附属医院泌尿外科	2	8	1.0	2.0
5	朱永生	西南医科大学附属医院泌尿外科	18	48	4.0	6.0