含EB病毒LMP2A毕氏酵母表达载体的构建与表达LMP2A蛋白的检测

• 作者: 丁传林 周峰 姚堃 孙华 彭光勇 谢芳艺 陈云
• 来源期刊: 南京医科大学学报(自然科学版)
• 学科: 医学
• 关键词: EB病毒 LMP2A基因 毕氏酵母 表达
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 病原生物学与免疫学研究专题
• 页码范围: 297-300
• 页数: 4页
• 分类号: R786
• 字数: 3133字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2004.03.031

摘要

目的:构建EB病毒潜伏膜蛋白2A的表达载体,并在真核生物毕氏酵母细胞中表达.方法:用EcoR I和Not I将含LMP2A全长编码基因的质粒PCIcc双酶切后,克隆到毕氏酵母载体PICZαA中,构建重组表达质粒pPICZαA-LMP2A.pICZαA-LMP2A经Sac I酶切线性化,采用氯化锂的方法转化毕氏酵母GSI15,经YPD平板Zeocine抗性筛选获得LMP2A阳性克隆的菌株,用PCR鉴定阳性酵母转化子,并分别将阳性的酵母转化子在BMGY和BMMY培养基中进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳和western-blotting分析.结果:重组质粒pPICZαA-LMP2A经PCR和酶切鉴定为阳性.SDS-PAGE电泳和western-blotting结果显示表达蛋白的相对分子量为54 Kda,与预计值相同.结论:构建了LMP2A毕氏酵母表达载体,并在酵母细胞中成功表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚堃	南京医科大学微生物和免疫学系	93	802	14.0	25.0
2	彭光勇	南京医科大学微生物和免疫学系	24	265	5.0	16.0
3	丁传林	南京医科大学微生物和免疫学系	15	68	5.0	7.0
4	谢芳艺	南京医科大学微生物和免疫学系	20	115	5.0	10.0
5	孙华	南京医科大学微生物和免疫学系	9	94	5.0	9.0
6	周峰	南京医科大学微生物和免疫学系	25	206	6.0	14.0
7	陈云	南京医科大学微生物和免疫学系	27	69	4.0	7.0