EB病毒LMP2A和EB病毒BZLF1融合基因反转录病毒表达载体的构建

• 作者: 徐爱晶 朱伟 罗兵
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: LMP2A BZLF1 融合基因 逆转录病毒 表达载体
• 年，卷（期）: 2007,（50）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 10109-10112
• 页数: 4页
• 分类号: R730.231
• 字数: 4642字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.50.032

摘要

目的:将LMP2A和BZLF1基因进行融合同时可发挥LMP2A诱导特异性CTL和BZLF1基因诱导潜伏期EBV进入裂解期复制的作用,协同杀伤EBV阳性肿瘤细胞.实验拟构建含EB病毒潜伏膜蛋白2A编码基因和即刻早期基因融合基因的反转录病毒表达载体,并筛选建立携带该基因的高滴度产毒细胞系.方法:实验于2006-08/2007-08在济宁医学院微生物教研室和青岛大学医学院微生物教研室进行.应用反转录-聚合酶链反应分别获得潜伏膜蛋白2A和即刻早期基因编码序列的cDNA,采用剪接式重叠延伸技术将两段基因通过多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列进行连接,构建融合基因Z2A.将融合基因Z2A定向插入逆转录病毒表达载体pMSCVpuro,形成重组质粒pMSCVpuro-Z2A,脂质体法将pMSCVpuro-Z2A转染反转录病毒包装细胞PT67.嘌呤霉素筛选产毒细胞克隆,扩大培养产毒细胞克隆,收获病毒进行滴度测定,RT-PCR检测产毒PT67细胞目的基因的转录表达.结果:限制性酶切、PCR及测序鉴定证实Z2A正确插入逆转录病毒表达载体,筛选获得了稳定产毒的嘌呤霉素抗性细胞克隆,收获病毒的滴度为7.8×106 CFU/L,且重组逆转录病毒在PT67细胞能有效转录.结论:携带Z2A基因的重组反转录病毒表达载体pMSCVpuro-Z2A构建成功,转染PT67细胞后包装出重组反转录病毒,进而筛选获得了能转录表达Z2A的产毒细胞系PT67-Z2A.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗兵	青岛大学医学院微生物学教研室	216	931	14.0	19.0
2	朱伟	济宁医学院微生物学教研室	17	37	3.0	5.0
3	徐爱晶	青岛大学医学院微生物学教研室	9	75	6.0	8.0