EB病毒潜伏期膜蛋白2A重组腺病毒的制备及表达

• 作者: 姚堃 彭光勇 徐江英 许琳 谢芳艺
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: EB病毒 LMP2A基因 腺病毒载体 克隆与鉴定 基因转移 基因表达
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 155-158,161
• 页数: 5页
• 分类号: R373
• 字数: 3592字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建EB病毒潜伏期膜蛋白2A重组腺病毒,研究EB病毒相关肿瘤治疗性疫苗.方法:利用RT-PCR扩增出EB病毒B95.8株潜伏期膜蛋白2A(LMP2A)全部编码蛋白的基因,并克隆至pGEM-T载体中.并将LMP2A cDNA插入E1、E3区替代的腺病毒载体pAX1CW,选择正确的克隆pAX1CW-LMP2A与Ad5 DNA-末端肽复合体共转染293细胞,通过同源重组获得复制缺陷型的重组腺病毒.提取重组腺病毒转染的293细胞DNA,通过酶切初步鉴定.选择阳性克隆感染CV1细胞,通过流式细胞仪和激光共聚集显微镜分析LMP2A蛋白表达情况.结果:挑选同源重组17个克隆中有9个为阳性克隆,扩增到的病毒滴度为2.3×108 pfu/ml.用MOI=100的重组腺病毒感染CV1细胞,48 h后在激光共聚焦显微镜下可见LMP2A蛋白表达于CV1细胞膜上,经流式细胞仪检测LMP2A蛋白表达阳性细胞数为94.4%.结论:重组腺病毒能有效地介导LMP2A基因的表达,为进一步研究该基因功能及其工程疫苗打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚堃	南京医科大学微生物与免疫学教研室	93	802	14.0	25.0
2	彭光勇	南京医科大学微生物与免疫学教研室	24	265	5.0	16.0
3	谢芳艺	南京医科大学微生物与免疫学教研室	20	115	5.0	10.0
4	许琳	南京军医学院生物基因工程中心	9	81	4.0	9.0
5	徐江英	南京军医学院生物基因工程中心	7	80	4.0	7.0