携带绿色荧光报告基因EBV-LMP2A真核表达载体构建及转染鼻咽癌细胞

• 作者: 余展鹏 撖子建 蔡琰 鄢雪敏 黄元姣
• 来源期刊: 中国癌症防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽肿瘤 EBV潜伏膜蛋白2A 序列克隆 pIRES2-Zs-Green1载体 pIRES2-Zs-Green1-LMP2A真核表达载体 基因转染 基因表达
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 207-211
• 页数: 5页
• 分类号: R739.6
• 字数: 3721字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5671.2016.04.02

摘要

目的 构建携带绿色荧光基因的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A,并转染至鼻咽癌CNE2细胞.方法 从EB病毒阳性的狨猴淋巴瘤细胞B95-8中克隆EB病毒编码的EBV潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)序列,并定向克隆入pIRES2-Zs-Green1载体,双酶切及测序鉴定重组的真核表达载体pIRES2-Zs-Green 1-LMP2A;通过脂质体转染将重组的真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A转染至鼻咽癌CNE2细胞(实验组),同时另设转染pIRES2-Zs-Green1载体的阴性对照组及未转染的空白对照组.利用质粒所携带的绿色荧光蛋白表达计算细胞转染效率,RT-PCR检测目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2细胞中的表达.结果 双酶切及测序鉴定证实真核表达载体pIRES2-Zs-Green1-LMP2A构建成功,荧光显微镜下发现实验组和阴性对照组细胞均发出绿色荧光,实验组细胞转染率约为75％;RT-PCR检测发现实验组细胞中有目的基因LMP2A表达,但阴性对照组和空白对照组均未检测到目的基因表达.结论 成功构建了pIRES2-Zs-Green1-LMP2A真核表达载体并转染鼻咽癌CNE2细胞,目的基因LMP2A可在转染的鼻咽癌CNE2细胞中稳定表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄元姣	530021南宁 广西医科大学生物化学与分子生物学教研室	1	0	0.0	0.0