SARS-N蛋白真核表达质粒的构建及其免疫原性

• 作者: 曾政 王希良 王英 田光 石辛甫 赵光宇 马丽娟
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SARS-CoV 真核表达质粒 核蛋白
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 281-284
• 页数: 4页
• 分类号: R78
• 字数: 3311字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2004.04.010

摘要

目的选取SARS-CoV N蛋白编码基因为研究对象,构建真核表达质粒PVAX1/N,并在体外转染COS-7细胞的基础上免疫Balb/c小鼠,测定血清总IgG水平及诱发的细胞免疫反应.方法用RT-PCR方法从感染SARS病毒的VeroE6细胞中扩增得到约1 269bp的片段,构建重组真核表达质粒PVAX1/N,转染COS-7细胞后,用细胞免疫化学方法鉴定目的蛋白的表达;免疫Balb/c小鼠后,用ELISA方法测血清总IgG水平,MTS/PES比色法测定脾T淋巴细胞增殖,ELISPOT法测定CD8+T淋巴细胞的活性.结果构建的重组质粒经酶切及测序鉴定,与GenBank中登录的序列完全一致;细胞免疫化学鉴定结果显示:重组质粒可在COS-7细胞中表达有免疫原性的SARS-CoV N蛋白;免疫小鼠血清中检测到较高滴度的抗体;T淋巴细胞增殖及CTL活性均明显优于对照组(P＜0.01).结论成功构建真核表达质粒PVAX1/SARS-CoV N,并能诱导免疫小鼠产生特异性的抗SARS抗体及特异性的细胞免疫反应.