二型谷氨酸羧肽酶稳定表达细胞株的建立

• 作者: 姚勇 孔燕国 张波 李桂林 王任直 王欣 田士强 窦万臣
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 二型谷氨酸羧肽酶 表达载体 稳定表达细胞株
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 331-334
• 页数: 4页
• 分类号: R329.2+4
• 字数: 2872字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6325.2004.03.021

摘要

为了深入研究二型谷氨酸羧肽酶(glutamate carboxypeptidase Ⅱ,GCP Ⅱ)功能和了解其在兴奋性氨基酸代谢过程中作用,拟构建GCP Ⅱ的表达载体,建立稳定表达细胞株; 采用聚合酶链反应,酶切连接,和蓝白筛选的方法,构建表达载体;磷酸钙共沉淀的方法转染HEK293细胞,G418筛选阳性细胞克隆;逆转录聚合酶链反应和免疫荧光细胞染色的方法鉴定阳性细胞株.采用PCR方法扩增出GCP Ⅱ;构建含有GCP Ⅱ基因的表达载体--pcDNA3.1-NA;建立了细胞株 HEK 293-NA.成功构建了GCP Ⅱ的表达载体,建立了稳定表达细胞株,为深入研究该酶的功能和兴奋性氨基酸毒性作用奠定了基础.