大鼠神经生长因子腺病毒表达载体的构建及其在星形胶质细胞中的表达

• 作者: 刘宁 周明卫 戴如飞 朱风仪 王东 赵春生
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 神经生长因子 遗传载体 腺病毒科 星形细胞
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 122-126
• 页数: 5页
• 分类号: R349|R373.1|R322.8
• 字数: 3842字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2004.02.013

摘要

目的构建含有大鼠β-NGF基因的重组腺病毒载体并观察其在星形胶质细胞的表达,为下一步在动物体内进行中枢损伤的基因治疗提供基础.方法设计一对含有HindⅢ及Sal Ⅰ酶切位点的β-NGF基因上下游引物,PCR法扩增含有大鼠β-NGF cDNA的质粒pUC19-β-NGF,产物经HindⅢ及Sal Ⅰ双酶切,插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,获得重组质粒pAdTrack-β-NGF,经Pme Ⅰ酶线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转入BJ5183中进行同源重组,重组子经卡那霉素抗性筛选及酶切分析,阳性克隆经293细胞包装,扩增,空斑法测定病毒滴度,转化体外培养的星形胶质细胞.通过RT-PCR、ELISA、Western blot法检测其在星形胶质细胞中的表达. 结果 PCR及酶切鉴定确认获得重组腺病毒载体pAd-β-NGF,重组腺病毒在293细胞中包装成功,病毒滴度达2×1011 PFU/ml.病毒上清液经ELISA 检测,β-NGF表达的量为(94.50±4.58) ng/L.结论该重组腺病毒载体的构建为下一步在动物体内的表达及中枢神经系统损伤的转基因治疗提供了一定的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵春生	南京医科大学第一附属医院神经外科	47	177	7.0	9.0
2	刘宁	南京医科大学第一附属医院神经外科	136	504	11.0	15.0
3	周明卫	南京医科大学第一附属医院神经外科	32	122	7.0	9.0
4	王东	南京医科大学第一附属医院神经外科	32	142	6.0	11.0
5	朱风仪	南京医科大学第一附属医院神经外科	30	136	7.0	9.0
6	戴如飞	南京医科大学第一附属医院神经外科	5	9	2.0	2.0