口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆及3AB基因的原核表达

• 作者: 刘在新 卢曾军 常惠芸 曹轶梅 胡永浩 谢庆阁
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 3ABC基因 3AB基因 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 31-34
• 页数: 4页
• 分类号: Q78|S852.65
• 字数: 3719字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4545.2004.01.013

摘要

从感染口蹄疫病毒(foot-and mouth disease vtrus,FMDV)的细胞中提取总RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT PCR)获得了长度约为1 400 bp的核酸片段,与预期长度相符.扩增产物经克隆后,测序证明其含有完整的3AB3C基因.该序列与国外参考序列01K/66相比,同源性在99%以上.亚克隆3ABC基因至表达载体pTriEx-4 Neo中,通过序列分析发现,克隆到pTriEx-4 Neo载体上的片段于3ABC基因709～725bp之间有1 7bp的缺失,碰巧在3AB基因后形成一终止密码子,但3AB基因的阅读框架完整.选出含有3AB基因完整阅读框架的阳性克隆,用IPTG诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳、Wesiern blottmg分析,结果表明,3AB基因在大肠杆菌中成功表达.其表达产物为分子质量33.5 ku的融合蛋白,并能被口蹄疫病毒阳性血清识别.经薄层扫描分析,表达的目的蛋白占总蛋白量的26%以上.该项研究为应用重组FMDV非结构蛋白为抗原建立感染和免疫的鉴别诊断方法提供了依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	常惠芸	中国农业科学院兰州兽医研究所农业部病毒学重点实验室	49	411	12.0	18.0
2	刘在新	中国农业科学院兰州兽医研究所农业部病毒学重点实验室	47	488	11.0	21.0
3	胡永浩		96	391	9.0	16.0
4	曹轶梅	中国农业科学院兰州兽医研究所农业部病毒学重点实验室	18	65	4.0	8.0
5	卢曾军	中国农业科学院兰州兽医研究所农业部病毒学重点实验室	25	150	5.0	12.0