四种hGM-CSF/IL-6融合蛋白的基因构建、表达及活性比较

• 作者: 孙强明 孙茂盛 孙雯佳 徐维明 戴长柏 李亮助 谢天宏
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素-6 融合蛋白 克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 免疫治疗
• 页码范围: 128-133
• 页数: 6页
• 分类号: R392
• 字数: 4985字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2004.02.018

摘要

目的构建及表达具有hGM-CSF和hIL-6双重生物学活性的hGM-CSF/IL-6融合蛋白分子. 方法应用PCR技术对hGM-CSF和hIL-6的基因分别加以改造,同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3,克隆PCR产物,并构建成克隆有4种融合蛋白基因的pBV220表达质粒,4种融合蛋白分别是GM-CSF(9～127)-IL-6(29～184)(简称GI1)、GM-CSF(9～127)-IL-6(1～184)(简称GI2)、GM-CSF(1～127)-IL-6(1～184)(简称GI3)、GM-CSF(9～127)-IL-6(24～184)(简称GI4),表达质粒分别导入E.coli BL-21中诱导表达.通过Q Sepharose HP离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白.使用hGM-CSF依赖细胞株TF1和hIL-6依赖细胞株B9通过MTT法测量融合蛋白的生物学活性. 结果对4种融合蛋白基因的测序结果表明,其序列与理论设计完全一致,表达质粒在E.coli BL-21中均得到高效表达,表达的融合蛋白均占到总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在,通过Q Sepharose HP离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得4种目的蛋白,其纯度均达到95%以上.活性测定结果表明4种融合蛋白均具有较高的hGM-CSF和hIL-6的双重生物学活性. 结论获得了具有较高纯度和双重生物学活性的GM-CSF/IL-6融合蛋白.