乳链菌表达hGM-CSF基因的拼装及其载体pNCSF构建

• 作者: 张振书 杨晓强 武金宝 陈学清 马高峰
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 粒-巨噬细胞集落刺激因子 乳酸链球菌 基因拼装 基因克隆 载体
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 9-12
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 2453字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2007.01.003

摘要

目的 体外拼装适合在乳酸链球茵表达的人粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,hGM-CSF),并构建载体pNCSF.方法 根据hGM-CSF的氨基酸序列及乳酸链球菌偏好的密码子,将hGM-CSF基因外显子的全长碱基序列用DNAWORKS程序设计成16条互补的寡核苷酸片段,并且分别在第1条和第16条寡核苷酸片段上分别设计PstⅠ和BBamHⅠ酶切位点,将相同终浓度的寡核苷酸混合进行PCR反应,完成hGM-CSF基因拼接,得到目的 基因片段,对寡核苷酸片段进行拼装和扩增,产物稀释后进一步纯化扩增,在Tag酶存在的条件下对产物两末端加T,然后TA克隆于pGEM T easy载体中,经酶切鉴定得到阳性克隆并经测序验证.然后亚克隆于含有P59启动子、USP45蛋白信号肽的pNBCl000载体.结果 通过PCR得到420左右目的 DNA片段,获得了hGM-CSF和pNCSF阳性克隆,其DNA测序结果与设计序列完全一致.结论 运用基因拼装及克隆技术成功拼装了hGM-CSF基因及构建了载体pNCSF,为乳酸链球茵表达重组hGM-CSF奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张振书	南方医科大学南方医院消化内科	57	191	8.0	10.0
2	陈学清	南方医科大学南方医院消化内科	16	88	6.0	9.0
3	马高峰	南方医科大学南方医院消化内科	5	20	2.0	4.0
4	杨晓强	南方医科大学南方医院消化内科	11	27	3.0	4.0
5	武金宝	南方医科大学南方医院消化内科	20	86	6.0	7.0