应用噬菌体展示技术筛选HBsAg启动子I的DNA结合蛋白

• 作者: 刘妍 刘敏 吴煜 张黎颖 成军 杨艳杰 王建军 王春花 钟彦伟 陈东风 黄燕萍
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 年，卷（期）: 2004,（11）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 2737-2739
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 3890字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2004.11.053

摘要

目的:通过筛选HBsAg基因启动子I(SPI,surface promoter I)结合蛋白,为HBV复制机制的研究探索新的途径.方法:应用噬菌体展示技术,以HBsAg基因启动子I的聚合酶链反应(PCR)产物DNA作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮"黏附-洗脱-扩增"筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索.结果:噬菌体经富集后,从随机筛选的14个克隆中得到8个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过同源性搜索,确定了和HBV表面抗原基因启动子I特异结合的肝细胞蛋白,共编码7种蛋白.其中3个克隆编码未知功能蛋白;其余的克隆分别编码4-氨基丁酸氨基转移酶、触珠蛋白、复制蛋白等蛋白.结论:用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBsAg基因启动子I的结合蛋白,分析了该蛋白的编码基因.