反义BTEB2腺病毒载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

• 作者: 何国祥 唐波 李德
• 来源期刊: 医学研究生学报
• 学科: 生物学
• 关键词: BTEB2 反义RNA 腺病毒载体 血管平滑肌细胞
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 398-400,403
• 页数: 4页
• 分类号: Q754
• 字数: 2418字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-8199.2004.05.005

摘要

目的:构建反义BTEB2重组腺病毒载体,以研究BTEB2反义RNA对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及动脉再狭窄的影响. 方法:从培养的大鼠VSMC中提取总RNA,通过RT-PCR制备BTEB2 cDNA,将BTEB2 cDNA反向连接至腺病毒穿梭质粒pDC315中,构建重组穿梭质粒pDC315 ASBTEB2, 将其与腺病毒基因组质粒pBHGlox ΔE1,3Cre共转染293细胞获得重组腺病毒,采用PCR方法对其进行鉴定;用重组腺病毒感染VSMC,通过RT-PCR检测BTEB2反义RNA在VSMC中的表达. 结果:在病变293细胞的冻融上清中含有反义BTEB2重组腺病毒, 其滴度为5×109 ml.VSMC被重组腺病毒感染后,可检测到BTEB2反义RNA的表达. 结论:成功构建了反义BTEB2重组腺病毒载体;重组腺病毒可在VSMC中表达BTEB2反义RNA,为进一步研究BTEB2反义RNA对VSMC增殖及动脉再狭窄的影响奠定了基础.