5种多房棘球绦虫续绦期幼虫的制备RNA方法比较及长片段DNA RT-PCR扩增方法研究

• 作者: 刘杞 张洪花 王昌源 陈雅棠
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 长片段DNA,逆转录,聚合酶链式反应 多房棘球绦虫 DNA聚合酶,RNA制备方法
• 年，卷（期）: 2004,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 863-867
• 页数: 5页
• 分类号: R383
• 字数: 4822字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2004.10.011

摘要

目的探讨从多房棘球绦虫续绦期幼虫制备RNA的最佳方法,研究逆转录PCR扩增DNA长片段目的基因的方法.方法应用改良的琼脂糖核酸电泳方法和RT-PCR技术比较观察了5种商品化RNA/mRNA提取试剂/试剂盒用于提取多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA的效果;用琼脂糖凝胶电泳方法观察比较了不同的DNA聚合酶用于RT-PCR扩增长片段EMⅡ/3(1.72kb)和EM10(1.76kb)的效果.结果总RNA提取试剂盒(RNeasy Total RNA Kit)提取的多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA电泳显示出清晰的28 S、18 S rRNA条带和弥散于0.8kb至20kb之间未降解的mRNA,是唯一能逆转录扩增出单一目的条带的核酸提取物.Taq DNA聚合酶与高保真DNA聚合酶Pfu的混合制剂Taq Plus应用于RT-PCR可扩增出大量1720bp和1760bp单一目的基因.结论总RNA提取试剂盒(RNeasy Total RNA Kit)对多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA的提取效果最好;Taq Plus适合用于RT-PCR扩增长片段目的基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘杞		83	615	12.0	21.0
2	陈雅棠		190	1020	16.0	23.0
3	张洪花		8	32	4.0	4.0
4	王昌源	山东大学医学院传染病学教研室	17	56	5.0	6.0