荧光实时定量RT-PCR观察伤寒杆菌鞭毛z66和d/j抗原基因表达方法的建立

• 作者: 周丽萍 徐顺高 黄新祥
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 实时荧光定量RT-PCR 伤寒杆菌 随机引物
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 21-24
• 页数: 4页
• 分类号: R331
• 字数: 2822字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2005.01.007

摘要

目的:构建荧光实时定量RT-PCR测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j 编码基因mRNA的方法.方法:根据伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j编码基因序列,设计引物扩增其读码框架内片段,克隆进pGEM-T Easy 质粒.质粒经PCR鉴定后,纯化并定量,作为荧光实时定量PCR的标准品,并制作标准曲线.利用不同渗透压下的鞭毛素基因表达差异,比较三种随机引物(6、8、10核苷酸)与特异性引物的逆转录效果,以确定一种最佳的随机引物用于多基因表达观察.结果:标准曲线有较好的线性(r=0.999),cDNA和标准品的PCR产物溶解曲线峰值一致.用8核苷酸随机引物进行逆转录的敏感度高于6、10核苷酸随机引物,低于特异性引物,但用其观测z66抗原基因和d/j抗原基因在高、低渗时表达变化趋势与用特异性引物测得结果一致.结论:成功构建用8核苷酸随机引物进行逆转录同时测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j 基因表达的荧光实时定量RT-PCR方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周丽萍	江苏大学医学技术学院	33	163	7.0	10.0
2	徐顺高	江苏大学医学技术学院	30	301	5.0	17.0
3	黄新祥	江苏大学医学技术学院	57	333	5.0	17.0