重组hTRAIL腺病毒载体的构建及其体外抗肿瘤效应的初步观察

• 作者: 云琳 倪海东 周倩 张瑞萍 樊克兴 郭亚军 金增强
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因 腺病毒载体 凋亡 肿瘤
• 年，卷（期）: 2005,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1144-1147
• 页数: 4页
• 分类号: R73-362
• 字数: 3422字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2005.10.016

摘要

目的:利用AdEasy 载体系统构建含人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand, TRAIL)全长基因的重组腺病毒载体,并初步观察其体外对肿瘤细胞的杀伤作用.方法:利用 RT-PCR法从人外周血单个核细胞(PBMCs)克隆人TRAIL全长基因.将hTRAIL cDNA克隆入穿梭质粒pAdTrack-CMV中, 与腺病毒骨架结构pAdEasy-1共同转化入大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,重组子经酶切鉴定正确后,用脂质体转染入人胚肾293细胞中,包装获得重组腺病毒颗粒,Western blot 检测TRAIL蛋白的表达.将重组腺病毒颗粒体外感染对TRAIL敏感的3种人肿瘤细胞(淋巴瘤细胞Jurkat、前列腺癌细胞PC-3、宫颈癌细胞HeLa)后,进行AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞术检测、细胞基因组的DNA电泳和锥虫蓝染色,以观察TRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用.结果:利用RT-PCR法从人PBMCs中扩增出843 bp的cDNA片段,测序证实为人TRAIL基因.重组子经酶切鉴定正确,Western印迹证实感染TRAIL腺病毒的293细胞中有TRAIL蛋白的正确表达.将重组腺病毒颗粒体外感染HeLa、PC-3和Jurkat细胞,4 h后用AnnexinⅤ-FITC/PI染色,流式细胞术检测AnnexinⅤ+PI-细胞群分别占(41.15±3.12)%、(46.20±4.07)%、(38.56±3.45)%;24 h后,抽提Jurkat细胞的基因组进行DNA电泳,出现细胞凋亡时特有的DNA条带;36 h后用锥虫蓝对HeLa 、PC-3、Jurkat细胞染色,细胞死亡率分别为(75±5)%、(82±7)%、(70±5)%.结论:成功构建了hTRAIL腺病毒载体,体外感染HeLa 、PC-3、Jurkat肿瘤细胞后,能通过诱导细胞的凋亡而杀伤肿瘤细胞;为下一步的基因治疗和基础研究打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	云琳		16	58	4.0	7.0
2	郭亚军	第二军医大学基础医学部国际合作肿瘤研究所	36	219	8.0	13.0
3	周倩	第二军医大学基础医学部国际合作肿瘤研究所	3	9	2.0	3.0
4	张瑞萍	第二军医大学基础医学部国际合作肿瘤研究所	7	13	3.0	3.0
5	金增强	第二军医大学长征医院口腔科	5	8	2.0	2.0
6	倪海东	第二军医大学基础医学部国际合作肿瘤研究所	2	5	1.0	2.0
7	樊克兴	第二军医大学基础医学部国际合作肿瘤研究所	5	3	1.0	1.0